Skip to content

Zakażenie ludzkim przez ortopoksywirusa wirusa zarodowego w kraju Georgia AD 2

1 miesiąc ago

730 words

Ten pacjent, który miał niezwykłą historię medyczną, zgłosił, że nie otrzymał szczepionki przeciwko ospie prawdziwej. Miał gorączkę i dreszcze tego samego dnia, w którym pojawiły się zmiany; limfadenopatia w lewej piersi rozwinęła się 5 dni później. Biorąc pod uwagę historię ekspozycji pacjentów na chore krowy i obecność charakterystycznych zmian, podejrzewano ospę krowią. Metody
Testowanie diagnostyczne próbek pacjentów
W celu wykrycia anty-ortopoksywirusa IgM i IgG w surowicy pobranej od obu pacjentów z indeksem wykorzystano testy immunoenzymatyczne (ELISA). Próbki surowicy uznano za pozytywne w przypadku IgG przeciwko ortopoksywirusowi, jeśli wynik testu ELISA w surowicy był dodatni. rozcieńczenie 1: 160.
Materiał ze zmian skórnych uzyskano za pomocą gazików klinicznych. DNA ekstrahowano z wacików i badano przesiewowo za pomocą ilościowych testów czasu reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym na orthopoxvirusy wirusa niefilolowego12. Dodatkowe ilościowe analizy PCR do wykrywania specyficznych ortopoksywirusów (wirusy typu małpki, ospa i krowianki). ) zostały następnie wykonane w celu określenia gatunku wirusa w próbkach, które uzyskały wynik dodatni za pomocą testu przesiewowego.12-14 Gdy ostateczne oznaczenie gatunku okazało się nieskuteczne, startery ukierunkowane na wysoce konserwowany gen polimerazy RNA zależny od DNA ortopoksywirusa zostały użyte, a produkty PCR zostały zsekwencjonowane za pomocą metody Sangera.15
Wymazy eluatu stosowano do infekowania komórek BSC-40; DNA ekstrahowano z komórek, które miały 80 do 100% efektu cytopatycznego po jednym pasażu.12,13 Pełne sekwencjonowanie genetyczne przeprowadzono w Otogenetics przy użyciu platformy Illumina HiSeq 2000 (Illumina). Dane sekwencji zebrano w kontigi przy użyciu oprogramowania CLC Genomics Workbench (CLC Bio), a dane wyekstrahowano z kontigów na podstawie podobieństwa sekwencji. Analiza filogenetyczna została zakończona przy użyciu danych sekwencyjnych z dziewięciu genów zlokalizowanych w centralnym konserwatywnym regionie genomu orthopoxvirus.5.
Badanie epidemiologiczne
Rozpoczęto dochodzenie w regionie, w którym obaj badani pacjenci żyli w celu wykrycia dodatkowych przypadków infekcji u ludzi i zwierząt oraz w celu określenia możliwości przeniesienia z człowieka na człowieka. Osoby, które zostały uznane za zagrożone zakażeniem, takie jak osoby pracujące z bydłem (w tym bydło należące do stad innych niż stado wskaźnikowe) i osoby, które weszły w fizyczny kontakt z pacjentami wskaźnikowymi, zostały włączone do badania próbka wygody. Respondentów zapytano, czy w ostatnim roku mieli podejrzenia co do zakażenia ortopoksywusem lub czy wiedzieli o innych osobach lub zwierzętach z uszkodzeniami.
Próbki surowicy, które zostały pobrane od wszystkich osób, które wyraziły zgodę, były testowane pod kątem przeciwciał przeciw ortopoksywirusowi IgM i IgG.11 Przeanalizowaliśmy głowy i strzyki krowy, które były własnością lub były kontrolowane przez respondentów, a my uzyskaliśmy próbki surowicy od krów, gdy rozmówcy wyrazili zgodę. Protokół poddano ocenie osób z CDC i ustalono, że nie będzie to badanie z udziałem ludzi; jako takie, zatwierdzenie przez instytucyjną komisję odwoławczą i pisemną świadomą zgodę nie były wymagane.
Testowanie próbek od zwierząt
Aby zidentyfikować potencjalne rezerwuary dla wirusa, małe ssaki zostały złapane na obszarach, na których indeksowane stado wypasało w ciągu tygodnia prowadzącego do początkowych chorób u krów. 16 Uwięzione ssaki poddano wnikliwemu badaniu patologicznemu, zbieraniu surowicy i sekcji zwłok. został wyekstrahowany z próbek wątroby przeszukiwany pod kątem wirusów ortopoksywirusa nie zawierającego varioli za pomocą ilościowej PCR.
Próbki surowicy od krów i małych ssaków testowano na anty-orthopoxvirus IgG przy użyciu testu ELISA. Płytki ELISA pokryto oczyszczonym nowym izolatem wirusa i dodano seryjne rozcieńczenia próbek surowicy zwierzęcej (do 1: 400). Jako przeciwciało drugorzędowe zastosowano sprzężoną peroksydazę A. z surowicy sprzężonej w rozcieńczeniu 1: 5000.
Retrospektywna ocena zarchiwizowanych próbek klinicznych
Miejscowe infekcje ortopoksywirusowe mogą przypominać inne choroby skórne, takie jak wąglik. W związku z tym uzyskaliśmy zarchiwizowane ludzkie próbki kliniczne, które pierwotnie zostały poddane testom diagnostycznym w celu wykrycia wąglika, ale które były ujemne na wąglika.
Przebadaliśmy te próbki pod kątem wirusów ortopoksywirusów nie zawierających varioli, stosując ilościową reakcję PCR. Próbki, które uzyskały pozytywny wynik, przeszły dodatkowe reakcje w celu ostatecznego ustalenia gatunku wirusa.
Wyniki
Wyniki badań diagnostycznych próbek pacjentów
Antyortopowirusy IgM i IgG wykryto w próbkach surowicy pobranych od obu pacjentów z indeksami około 3 tygodnie po wystąpieniu choroby
[przypisy: wzorcowanie mierników, hologramy els, usuwanie blizn potrądzikowych ]

Powiązane tematy z artykułem: hologramy els usuwanie blizn potrądzikowych wzorcowanie mierników