Skip to content

Monokarboksylan Transporter 1 Wykorzystanie niedoboru i ketonów AD 2

1 miesiąc ago

685 words

Kontrolne próbki krwi pobrano losowo z krwi pozostałej po testach diagnostycznych, którą anonimowo użyto w tym badaniu. Immunoblot przeprowadzono z użyciem homogenatów fibroblastów i oczyszczonego przez powinowactwo króliczego przeciwciała poliklonalnego przeciwko MCT1 i MCT4. Homogenaty fibroblastów od 10 zdrowych ochotników również zastosowano jako kontrole. Dalsze szczegóły dotyczące badań funkcjonalnych i ekspresji są dostępne w dodatkowym dodatku. Referencyjne wyniki krwi z badania dzieci przed i po 24 godzinach postu otrzymano z opublikowanych danych.7 Analiza statystyczna
Wszystkie zastosowane testy statystyczne były dwustronnymi niesparowanymi t-testami. Wartości P mniejsze niż 0,05 uważano za wskazujące na istotność statystyczną.
Wyniki
Opis przypadku
Pacjent z indeksem miał powtarzające się epizody głębokiej kwasicy metabolicznej, przy pH krwi poniżej 7,00 przy trzech okazjach, przy jednoczesnym ogromnym wydalaniu z moczem 3-hydroksymaślanu i acetooctanu, z poziomem mleczanu w osoczu i amoniakiem pozostającymi w normalnym zakresie. Między epizodami wyniki analiz krwi były prawidłowe. Dodatkowy dodatek zawiera obszerny opis przypadku.
Badania genetyczne
Analiza macierzy SNP u pacjenta wskaźnikowego wykazała 36 homozygotycznych regionów genomowych większych niż Mb, z 7 z 36 większych niż 10 Mb, które potwierdziły pokrewieństwo. Ukierunkowane sekwencjonowanie exome kodujących części tych homozygotycznych regionów u pięciu członków rodziny dało dziewięć rzadkich wariantów. Spośród nich, najsilniejszym kandydatem była insercja pojedynczych nukleotydów zakłócająca ramkę odczytu MCT1 przy asparaginie 15 (c.41dupC, numer referencyjny referencji National Center for Biotechnology Information NM_001166496.1). Prawidłową segregację tej mutacji w rodzinie potwierdzono za pomocą sekwencjonowania Sangera. Wariant ten był nieobecny w wielu dużych bazach danych (1000 genomów, dbSNP i Narodowy Instytut Serca, Płuc i Krwi [NHLBI] GO Exome Sequencing Project Exome Variant Server [data release ESP6500]). Wstawienie dodatkowego nukleotydu we wczesnej fazie genu powoduje przesunięcie ramki odczytu, a tym samym utratę funkcji MCT1.
MCT1 Mutacje u dodatkowych pacjentów z kwasicą ketonową
Ryc. 1. Ryc. 1. Niedobór MCT1 u pacjentów z epizodami kwasicy ketonowej. Panel A pokazuje zidentyfikowane mutacje w białku transportera (MCT1) monokarboksylanu, przy czym wskazano cztery różne egzony. Pełnowartościowe białko MCT1 składa się z 500 aminokwasów. Mutacje heterozygotyczne zaznaczono na szaro, a mutacje homozygotyczne na czarno. Panel B pokazuje przykłady sekwencjonowania komplementarnego DNA w fibroblastach od pacjentów z mutacjami heterozygotycznymi; kolory reprezentują zasady: zielony oznacza A, czerwony T, czarny G i niebieski C. Strzałki wskazują zmutowaną pozostałość. Większość transkryptu jest niezmutowaną sekwencją MCT1, a mniejszość jest zmutowaną sekwencją w wyniku rozpadu z udziałem nonsensu. Panel C pokazuje stosunek MCT1: tubuliny z ilościowego immunoblotu z homogenatami fibroblastów od 4 pacjentów z heterozygotycznymi mutacjami obciętymi w porównaniu z 10 zdrowymi kontrolami. Panel D pokazuje wypływ mleczanu z erytrocytów endogennie obciążonych mleczanem. Zmętnienie zmierzono dla pacjentów z homozygotyczną mutacją MCT1 i ich heterozygotycznymi członkami rodziny (cienie stałe oznaczają p.Arg313Ter, kwadraty p.Arg328Ter i trójkąty p.Asp15fs), pacjentem heterozygotycznym (p.Arg313Gln, oznaczonym przez diament), i kontrole (oznaczone kółkami otwartymi). Transport mleczanów u pacjentów homozygotycznych był znacząco niższy niż u obu grup kontrolnych i heterozygot. Zredukowano również średnią aktywność transportową mleczanu u heterozygot. Poziome słupki wskazują średnią aktywność transportu.
Tabela 1. Tabela 1. Widmo mutacji MCT1 i powiązanych fenotypów. MCT1 jest jednym z transbłonowych transporterów kodowanych przez członków rodziny genów SLC16; wśród tych transporterów transbłonowych wykazano, że MCT1, MCT2, MCT3 i MCT4 transportują monokarboksylany, w tym ciałka mleczanowe i ketonowe. 8 MCT1 wymaga glikoproteiny BSG (zwanej również CD147) dla prawidłowej ekspresji subkomórkowej. 99,10 Dlatego zsekwencjonowaliśmy MCT1 i powiązane geny w serii 96 pacjentów z niewyjaśnioną kwasicą ketonową. Zidentyfikowaliśmy siedem dodatkowych podejrzanych, szkodliwych wariantów, wszystkie w MCT1, w tym sześć mutacji skracających i jedną mutację missense (rysunek 1A i tabela 1). Oczekuje się, że wszystkie mutacje ścinające spowodują utratę funkcji białka. Mutacja mutacji, p.Arg313Gln, jest ukierunkowana na wysoce konserwatywną resztę, która jest niezbędna dla aktywności katalitycznej.11 Łącznie zidentyfikowaliśmy 9 pacjentów z mutacjami w MCT1, 3 homozygotycznych i 6 heterozygotycznych, w tym 2 rodzeństwa
[podobne: olejek moringa, olejek jojoba, mezoterapia igłowa ]

Powiązane tematy z artykułem: mezoterapia igłowa olejek jojoba olejek moringa