Skip to content

FOXP3 Mutacja domeny widełkowej i komórki T regulatorowe w zespole IPEX

2 miesiące ago

1054 words

Dysregulacja immunologiczna, wieloendokrynopatia, enteropatia, zespół sprzężony z chromosomem X (IPEX), rzadkie schorzenie charakteryzujące się autoimmunizacją wielonarządową, często skutkują śmiercią w okresie niemowlęcym.1 Zespół IPEX wynika z mutacji w genie P3 (FOXP3), który koduje represor transkrypcyjny uważany za głównego regulatora różnicowania w regulacyjnych komórkach T (Treg) CD4 +. [23] Scharakteryzowano wiele mutacji FOXP3, które skutkowały wieloma wynikami klinicznymi.1-3 Ponieważ ani sekwencjonowanie genetyczne, ani ekspresja białka nie są wiarygodnie skorelowane z objawy kliniczne w zespole IPEX, 4 identyfikacja konsekwencji funkcjonalnych poszczególnych mutacji ma kluczowe znaczenie dla uzyskania wglądu w prognozy i możliwe sposoby leczenia tego zespołu.
Opowiadamy o wcześniaku u noworodka z cechami klinicznymi i wynikami badań laboratoryjnych, które były zgodne z ciężkim fenotypem zespołu IPEX (patrz Dodatek dodatkowy, dostępny wraz z pełnym tekstem tego listu na stronie). Sekwencjonowanie genu FOXP3 ujawniło mutację 1150G . A missense w eksonie 11 skutkującą substytucją alaniny na treoninę w reszcie 384 (A384T) w obrębie domeny FOXP3 wiążącej DNA z widelcem. Ta mutacja jest zwykle związana z łagodnymi fenotypami zespołu IPEX1,5; jednak pacjent ten zmarł w wieku 7 tygodni pomimo leczenia syrolimusem.
Ryc. 1. Ryc. 1. Ocena fenotypu i funkcji regulacyjnych komórek T w zespole IPEX. Dysregulacja immunologiczna, zespół wieloendokrynny, enteropatia, zespół sprzężony z chromosomem X (IPEX) jest spowodowany mutacją missense w dziedzinie widełek FOXP3. Panel A pokazuje normalne częstotliwości limfocytów T wyrażających FOXP3 w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej u naszego pacjenta z zespołem IPEX i mutacją A384T. Przedstawiono także ekspresję FOXP3 w komórkach T CD4 + izolowanych z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej u naszego pacjenta i zdrowej osoby dorosłej kontrolnej. Jak pokazano w obszarach pudełkowych, FOXP3 jest wykrywalny w komórkach Treg u pacjenta z mutacją A384T, aczkolwiek w mniejszej proporcji iz niższym poziomem ekspresji niż w regulatorowych komórkach T (Treg) w kontroli (średnia intensywność fluorescencji [MFI] ], 31 vs. 50). Ponadto poziom ekspresji CD25 (interleukiny-2R.), powszechnie stosowanego markera Treg, był również niższy w komórkach Trex FOXP3 + u pacjenta z mutacją A384T niż w komórkach kontrolnych. Wysokość (oś y) histogramu odzwierciedla procent maksymalnej liczby limfocytów T, które wykazują dowolną intensywność fluorescencji wyrażenia FOXP3 (na osi x). Panel B pokazuje, że pomimo wykrywalnych częstości komórek Trex FOXP3 +, efektorowe komórki T były rozregulowane pod względem funkcji u pacjentów z zespołem IPEX i mutacją A384T, w porównaniu z komórkami T CD4 + u pacjentów kontrolnych. Przedstawiono względne częstości komórek T CD4 + wytwarzających interferon-., interleukinę-10 i interleukinę-17 u pacjenta z zespołem IPEX oraz u zdrowego niemowlęcia kontrolnego po poliklonalnej in vitro pobudzeniu komórek jednojądrzastych krwi obwodowej. Linie przerywane wskazują typowy procent komórek wykazujących ekspresję cytokin obserwowanych u zdrowych osób dorosłych Zapalne wytwarzanie cytokin obserwowano głównie w komórkach T u pacjenta z zespołem IPEX i mutacją A384T i było wskazaniem rozregulowanej odpowiedzi immunologicznej u tego pacjenta. Jak pokazano w Panelu C, analiza pojedynczych komórek ujawniła wadliwą funkcję komórek Treg FOXP3 + u pacjenta z mutacją A384T. Przeprowadzono testy supresji in vitro w celu oceny wpływu mutacji A384T na funkcję komórek Treg FOXP3 +. W tym celu linie komórek Trex FOXP3 + otrzymane od pacjenta kontrolnego i pacjenta z zespołem IPEX inkubowano razem z allogenicznymi limfocytami T CD4 + CD25Neg (stosunek 1: 1) i komórkami odżywczymi, w obecności stymulacji receptora komórek T . Proliferację oceniano pulsując obie hodowle 3H-tymidyną przez ostatnie 24 godziny 6 dni, podczas których próbki hodowano razem. Klony FOXP3 + pochodzące od pacjenta z mutacją A384T wykazały poważną utratę siły supresyjnej w porównaniu z komórkami Treg FOXP3 + w kontroli (P = 0,005). Szybkość supresji, w której pośredniczą komórki Treg, oblicza się za pomocą następującego wzoru: (średnia liczba zliczeń na minutę samych komórek efektorowych T) – (średnia liczba na minutę efektorowych komórek T plus współgranie Treg) / (średnia liczba na minutę efektorowych komórek T sam) × 100.
Pomimo ciężkiego obrazu klinicznego komórki T CD4 + eksprymujące FOXP3 były łatwo wykrywalne u pacjenta, chociaż na nieco zmniejszonym poziomie w porównaniu z tymi komórkami u pacjenta kontrolnego (Figura 1A). Niemniej jednak proporcje limfocytów T CD4 +, które wydzielają interleukinę-10, interleukinę-17 lub interferon-. we krwi pacjenta z zespołem IPEX, były odpowiednio około 8, 15 i 4 razy wyższe, ponieważ proporcje w krew pacjenta kontrolnego (Figura 1B), a wytwarzanie tej cytokiny jest w dużej mierze ograniczone do komórek T FOXP3-T (dane nie przedstawione). Zwiększone wytwarzanie cytokin zapalnych w komórkach T u pacjenta z zespołem IPEX, który miał mutację A384T, silnie sugeruje, że odpowiedzi zapalne efektorowe T-komórkowe są rozregulowane i że komórki Trex FOXP3 + z mutacją A384T są prawdopodobnie wadliwe w swojej funkcji (Figura 1B ).
Następnie wykorzystaliśmy wieloparametrową strategię jednokomórkową do bezpośredniej oceny konsekwencji mutacji A384T w stosunku do ekspresji FOXP3 względem parametrów funkcjonalnych Treg CD4 + w pierwotnych klonalnych liniach komórek T CD4 +. Pomimo wykrywalnych częstotliwości komórek Treg FOXP3 + w jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej, funkcja supresyjna była prawie nieobecna u klonów FOXP3 + u pacjenta z zespołem IPEX w porównaniu z komórkami Treg u pacjenta kontrolnego (Figura 1C); było to zgodne z rozregulowanymi odpowiedziami komórek T i ciężkim fenotypem zespołu IPEX.
Chociaż mutacja A384T w FOXP3 nie wpływa na ekspresję FOXP3, znosi funkcję supresyjną w komórkach Treg. Systemowa choroba autoimmunologiczna u tego pacjenta z zespołem IPEX jest prawdopodobnie konsekwencją wadliwej kontroli odpowiedzi immunologicznych za pośrednictwem komórki Treg. Konieczne są dalsze badania, aby rozwikłać podstawy molekularne leżące u podstaw działania mutacji A384T w FOXP3. Ciężki przebieg u naszego pacjenta, w porównaniu z przebiegiem u większości pacjentów z zespołem IPEX, którzy mają tę mutację, może być konsekwencją różnych czynników środowiskowych, genetycznych i epigenetycznych; w związku z tym istnieje zróżnicowane spektrum kliniczne i immunologiczne Nasze wyniki podkreślają potrzebę wyjścia poza prostą analizę mutacji i wykrywanie FOXP3 oraz przeprowadzenie badań funkcjonalnych komórek Treg u pacjentów, u których podejrzewa się zespół IPEX. Takie badania pomogą nam zrozumieć i poprawić rokowanie u dotkniętych chorobą pacjentów.
Eva d Hennezel, mgr inż.
Moshe Ben-Shoshan, MD
Centrum Zdrowia Uniwersytetu McGill, Montreal, QC, Kanada
[podobne: duodent, dyżury aptek wołów, apteki malbork dyżury ]

Powiązane tematy z artykułem: apteki malbork dyżury duodent dyżury aptek wołów